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正相色谱

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关键字:正相 

正相色谱

正相色谱

液色谱有正相和反相之分。如果采用极性固定相和相对非极性流动相,就称为正相;如果采用相对非极性固定相和极性流动相,则称为反相。由于极性化合物更容易被极性固定相所保留,所以正相液-液色谱系统一般可用于分离极性化合物。相反,反相液-液色谱系统一般可用于分离非极性或弱极性化合物。正相色谱的流出顺序是极性小的先流出,极性大的后流出;反相色谱的流出顺序正好相反。

其他有些色谱如柱色谱也有正反相之分。
正相色谱


附加问题:正相色谱和反相色谱的区别?如何切换呢?

反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。

正相色谱用的固定相通常为硅胶,以及其他具有极性官能团,如胺基团和氰基团的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷、氯仿、二氯甲烷等。

反相色谱切换正相色谱流程:
1、先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净,然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。
2、用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃,各冲系统1h。
3、最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h,同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相,保持50-60滴/min的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱,待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。
4、将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水,将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5h。注意观察泵压。
5、将流速渐次降到0ml/min,把二次蒸馏水更换为甲醇,,将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1h。

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